口腔修復(fù)臨床工作中,取印模及灌注模型等操作所引起的交叉感染,在國外已受到口腔醫(yī)師的日益重視。Powell 等1 對100 份取自不同城市印模的檢驗表明,67 %樣品有病原菌存在。Gerhardt 等2 的研究證明,藻酸鹽印模表面有滯留、吸附病毒的能力。Leunge 等3 的研究顯示,微生物可由印模污染石膏模、制作者,乃至打磨、拋光設(shè)備,從而引起交叉感染。據(jù)Runnell 4 的調(diào)查,美國修復(fù)科醫(yī)生血漿中HBV 陽性率高達(dá)1712 % ,遠(yuǎn)高于美國大眾的215 %。鑒于此,歐美國家的許多臨床醫(yī)師提出在修復(fù)操作中應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則,并展開了大量的研究工作。

      本研究比較2 %戊二醛和5 %艾力克浸泡或噴涂,以及臭氧柜對口腔印模及石膏模型的消毒作用,以探求適合我國國情的印模和石膏模型消毒方法。

1 　材料和方法

1. 1 　材料和設(shè)備

①Jeltrate 藻酸鉀印模粉普通凝固型 ,用臭氧消毒柜處理2 h。

②石膏母模,橡皮碗,調(diào)拌刀,托盤等,120 ℃高壓蒸氣滅菌處理60 min。

③013 %Na2SO4 溶液,作為消毒劑的中和液。篩選實驗證實本身及與消毒劑的反應(yīng)產(chǎn)物對幾種實驗菌均無抑制作用。

④2 %戊二醛溶液(華西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院配制) 。

⑤5 %艾力克溶液(華西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院生產(chǎn)) 。

⑥臭氧消毒柜 。

⑦表皮葡萄球菌菌株、血液鏈球菌ATCC1057、枯草桿菌芽孢ATCC19659(均由華西醫(yī)科大學(xué)口腔生物醫(yī)學(xué)工程重點實驗室微生物實驗室提供) 。

⑧Die2stone人造石粉 。

1. 2 　材料制備

①制備細(xì)菌懸液 取4～14 代表皮葡萄球菌培養(yǎng)平板,挑取菌苔,以無菌生理鹽水稀釋至濃度108 個/ ml 。用同樣方法分別制備血液鏈球菌懸液和枯草桿菌芽孢菌懸液。

②制取無菌印模和石膏模型 藻酸鉀印模材料用無菌生理鹽水調(diào)拌,用滅菌后的托盤及母模取57 個印模待用。制取24 個上頜石膏模型,經(jīng)高溫蒸氣滅菌,然后用無菌生理鹽水將其潤濕待用。

1. 3 　實驗分組和方法

1.3.1   分組　

      按照所涂細(xì)菌不同分為表皮葡萄球菌組、血液鏈球菌組和枯草桿菌芽孢組。每組中3 個無菌印模和3個無菌石膏模型不染菌作空白對照。余16 個印模和5 個石膏模型,用無菌棉簽分別蘸取3 種不同細(xì)菌懸液在表面均勻涂抹兩遍。然后再次分組作以下處理: ①2 %戊二醛處理組:1 個印模染菌后立即取樣作陽性對照,1 個印模染菌后靜置10 min 取樣,3 個印模用2 %戊二醛浸泡10 min ,3 個印模以2 %戊二醛噴涂后10 min 取樣。②5 %艾力克處理組:1 個印模染菌后立即取樣作陽性對照,1 個印模染菌后靜置10 min取樣,3 個印模用5 %艾力克溶液浸泡10 min ,3 個印模以5 %艾力克液噴涂后10 min 取樣。③臭氧柜處理組:1 個石膏模型染菌后立即取樣作陽性對照,1 個石膏模型染菌后靜置1h ,3 個石膏模型染菌后臭氧消毒柜處理1 h 取樣。操作中,噴涂使用同一類型噴槍,噴嘴距印模表面20 cm ,以每秒1 次的頻率噴涂10 次,控制噴涂壓力一致。

1. 3. 2 　方法　

①所有印模均經(jīng)中和液處理。吸取5 ml 中和液,分次沖洗印模表面,中和消毒劑防止其繼續(xù)抑制細(xì)菌生長。石膏模型不用中和液處理。

②取樣,接種菌落計數(shù),每個印模及石膏模型表面各加注5 ml 無菌生理鹽水,用振蕩器以恒定功率振蕩10 s ,再用微量吸管在各印模及模型表面的1 及6 舌面, 牙合面位置吸取10μl 液體,接種于培養(yǎng)平板。表皮葡萄球菌組與枯草桿菌組的平板,37 ℃需氧培養(yǎng)24 h 后進行集落形成單位(colony-forming unit ,CFU) 計數(shù)。血液鏈球菌組的平板,厭氧培養(yǎng)48 h 后進行CFU 計數(shù)。

2 　結(jié) 果

各組平板的CFU 計數(shù)結(jié)果見表1～3。

      消毒效果的評價指標(biāo)以抑菌率為準(zhǔn)5 ,抑菌率= (對照組回收菌數(shù)- 消毒組回收菌數(shù)) / 對照組回收菌數(shù)×100 %。由于每個印?；蚴嗄Ｐ捅砻娼臃N菌液濃度一致,取樣接種量均為10μl ,故以CFU計數(shù)表示回收菌數(shù)。以染菌后靜置組作為對照組,算得各組平板的抑菌率,結(jié)果見表4。

以α= 0. 05 為檢驗水準(zhǔn),用SAS 軟件對表4 數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。

      從表4 可見,2 %戊二醛浸泡、噴涂,5 %艾力克浸泡、噴涂,臭氧柜5 種方式對表皮葡萄球菌和血液鏈球菌的抑菌率無顯著性差異( P > 0105) 。在枯草桿菌芽孢組,2 %戊二醛浸泡與噴涂間,5 %艾力克浸泡與噴涂間,臭氧柜處理與其它各法間對枯草桿菌芽孢的抑菌率均有顯著性差異( P < 0105) 。2 %戊二醛浸泡與5 %艾力克浸泡其抑菌率無顯著性差異( P> 0105) ,2 %戊二醛噴涂與5 %艾力克噴涂其抑菌率無顯著性差異( P > 0105) 。

3 　討 論

      對消毒劑、消毒方式的評價實驗,按目的可分為三期6 :第一期是實驗室試驗,用以測定一種制劑是否有抗微生物作用;第二期是在實驗室內(nèi)模擬實際情況,以檢驗消毒程序;第三期是現(xiàn)場進行試驗,因其標(biāo)準(zhǔn)化實驗條件難以實現(xiàn),故不常用。本部分研究屬第二期。

      不同細(xì)菌對消毒方式有著不同的耐受力,故消毒學(xué)試驗選用的菌種應(yīng)為有代表性的標(biāo)準(zhǔn)菌株,或者是有實際意義,和對此種消毒方法有較高耐受性的菌株。目前國外對印模消毒效果的評價研究,采用的細(xì)菌標(biāo)本多為混合菌液7 ,或為一些抵抗力不強的細(xì)菌8 ,如鏈球菌、金色葡萄球菌、大腸桿菌等。但這些細(xì)菌既不是口腔常見細(xì)菌,又抵抗力較差。故本研究選用的是表皮葡萄球菌、血液鏈球菌和枯草桿菌芽孢。血液鏈球菌系口腔 很常見的細(xì)菌,在牙齒溝裂中檢出率可高達(dá)80 %10 ,為牙菌斑主要菌成分之一,亦是一種條件致病菌。表皮葡萄球菌則是院內(nèi)感染 很常被討論的細(xì)菌之一。枯草桿菌芽孢接種復(fù)活后,以繁殖體與芽孢形式混合存在,而芽孢有較強的生命力,能抵抗各種惡劣條件,包括各種較溫和的消毒措施。

      本研究選用中和劑是為了中和消毒劑作用,防止其繼續(xù)抑制細(xì)菌生長。但為排除中和劑及其反應(yīng)產(chǎn)物對細(xì)菌增殖及培養(yǎng)成份產(chǎn)生影響,應(yīng)在使用前做篩選試驗9 。經(jīng)篩選試驗表明013 %Na2SO4 溶液本身及其與2 %戊二醛或5 %艾力克的反應(yīng)產(chǎn)物均不會對本研究使用的3 種實驗細(xì)菌的生長繁殖產(chǎn)生影響。

      空白對照組的設(shè)立是為排除由操作原因可能帶來的污染。培養(yǎng)結(jié)果可見本研究中對材料器械的消毒準(zhǔn)備及操作過程是可靠的,均未帶來污染。染菌后靜置組的設(shè)立是為排除靜置過程中細(xì)菌自然的死亡。

      從本研究可見,無論2 %戊二醛浸泡、噴涂,還是5 %艾力克浸泡、噴涂及臭氧柜處理對表皮葡萄球菌和血液鏈球菌均可達(dá)到高的抑菌率。此時,各種消毒措施亦不能體現(xiàn)出消毒效能的差別。這與Rugge2burg 等8 結(jié)果一致。而枯草桿菌芽孢,由于有較強的存活能力,短時間的浸泡、噴涂或臭氧柜處理對它均不能達(dá)到高的抑菌率,且各種消毒方式的效能也表現(xiàn)出了差別,即浸泡法強于噴涂法,更強于臭氧柜處理。

      筆者認(rèn)為一種消毒方法要想達(dá)到高的消毒效能,除要求消毒劑自身有強的滅菌能力外,還要求其能與細(xì)菌充分接觸,在局部達(dá)到并維持盡可能高的濃度。在這一點上,顯然浸泡法比噴涂法更有優(yōu)勢,此優(yōu)勢在細(xì)菌具有較強的抵抗能力時體現(xiàn)更明顯。而臭氧因其為氣體,密度遠(yuǎn)小于液體,故消毒效能也明顯低于浸泡法和噴涂法。本研究結(jié)果證明2 %戊二醛浸泡、噴涂與5 %艾力克浸泡、噴涂,均可作為有效的印模消毒方法,而臭氧柜消毒法則可作為石膏模型的消毒方式。

來源:華西口腔醫(yī)學(xué)雜志